Сборник свойств химических реагентов подлежащих контролю и методов их лабораторного определения

ГОСУДАРСТВЕННОЕ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЕ НОРМИРОВАНИЕ

Руководитель Федеральной службы

по надзору в сфере защиты прав

потребителей и благополучия человека,

Главный государственный санитарный

врач Российской Федерации

4 декабря 2020 г.

КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

САНИТАРНО-БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ МИКРОБНОЙ

ОБСЕМЕНЕННОСТИ ОБЪЕКТОВ ВНЕШНЕЙ СРЕДЫ

1. Разработаны ФБУЗ «Федеральный центр гигиены и эпидемиологии» Роспотребнадзора (М.В. Зароченцев, В.В. Мордвинова, М.А. Ярославцева, А.А. Гарбузова).

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 4 декабря 2020 г.

3. МР 4.2.0220-20 введены взамен МУ 2657-82 «Методические указания по санитарно-бактериологическому контролю на предприятиях общественного питания и торговли пищевыми продуктами», утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 31.12.1982 N 2657.

I. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ И ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

1.1. Настоящие методические рекомендации (далее — МР) определяют порядок проведения санитарно-бактериологического исследования микробной обсемененности объектов внешней среды, с целью контроля микробной обсемененности и эффективности санитарной обработки инвентаря, оборудования, посуды, санитарной одежды и рук персонала.

1.2. МР предназначены для специалистов органов и организаций, осуществляющих федеральный государственный санитарно-эпидемиологический надзор, аккредитованных организаций, проводящих санитарно-эпидемиологические экспертизы, исследования и иные виды оценок, отбор проб, исследования и контроль за санитарно-гигиеническим состоянием и микробиологическими показателями.

1.3. Объектами, на которые распространяются настоящие МР, являются организации общественного питания населения, в том числе пищеблоки лечебных, детских, дошкольных и подростковых учреждений, торговые объекты и рынки, реализующие пищевую продукцию, предприятия пищевой промышленности, объекты по предоставлению гостиничных, бытовых, социальных услуг, услуг в области культуры, спорта, организации досуга, развлечений, продаже товаров производственно-технического назначения для личных и бытовых нужд.

1.4. При проведении исследований используются перечисленные в приложении 1 к настоящим МР питательные среды, реагенты и реактивы, а также аналогичные или с лучшими характеристиками.

1.5. В медицинских организациях бактериологическое исследование микробной обсемененности объектов внешней среды осуществляется в соответствии с методическими указаниями .

МУК 4.2.2942-11 «Методы санитарно-бактериологических исследований объектов окружающей среды, воздуха и контроля стерильности в лечебных организациях».

1.6. На предприятиях по производству пищевой продукции перечень микроорганизмов, не указанных в данных МР и подлежащих контролю (общее количество мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ), стафилококки, клостридии, бактерии родов Salmonella, Proteus, Listeria, Campylobacter и др.), определяется в соответствии с утвержденными в установленном порядке методическими документами и стандартами .

ГОСТ 10444.15, ГОСТ 31746, ГОСТ 29185; ГОСТ 31659; ГОСТ 28560; ГОСТ 32031; ГОСТ ISO 10272-1.

1.7. При проведении исследований микробной обсемененности объектов окружающей среды возможно применение альтернативных методов исследований, таких как использование петрифильмов, метода отпечатков (контактные экспресс-тесты, контактные чашки Родека, бактотест и др.), микробиологических анализаторов.

II. ОТБОР ПРОБ С ОБЪЕКТОВ ВНЕШНЕЙ СРЕДЫ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ

ИССЛЕДОВАНИЯ НА МИКРОБНУЮ ОБСЕМЕНЕННОСТЬ

2.1. Отбор проб с поверхностей различных объектов осуществляют методом смывов.

2.2. Для контроля микробной обсемененности и эффективности санитарной обработки смывы с объектов окружающей среды проводят до начала работы, либо во время производственного процесса после проведения надлежащей обработки поверхности. В случае необходимости выявления источника обсеменения при установленной микробной контаминации отбор производят с необработанных поверхностей.

2.3. Техника взятия смывов.

При отборе смывов с поверхности необходимо использовать стерильный тампон, увлажненный стерильной пептонной водой (пункт 1 приложения 1 к настоящим МР), внесенной в каждую пробирку в количестве не менее 2,0 мл. Допускается смачивание тампона (материала для отбора) стерильным изотоническим раствором хлорида натрия или иной допустимой транспортной средой, а также использование стерильных зонд-тампонов (свабов, тупферов и т.д.) промышленного производства. Тампон увлажняют наклонением пробирки или опусканием тампона в жидкость непосредственно перед взятием смыва.

В случае применения дезинфицирующего агента используется нейтрализатор дезинфицирующих средств. В зависимости от применяемого дезинфицирующего агента в качестве нейтрализатора допускается использование стерильных растворов химических веществ, например:

— для галоидактивных (хлор-, бром- и йодактивные) и кислородактивных (перекись водорода, ее комплексы с солями, надуксусная кислота, озон) — 0,1 — 1,0%-е растворы тиосульфата натрия;

— для четвертичных аммониевых солей (алкилдиметилбензиламмоний хлорид, дидецилдиметиламмоний хлорид и др.), аминов, производных гуанидина (полигексаметиленгуанидин гидрохлорид, хлоргексидин биглюконат и др.) — универсальный нейтрализатор, содержащий Твин 80 (3%), сапонин (0,3 — 3%), гистидин (0,1%), цистеин (0,1%);

— для альдегидов (глутаровый альдегид, глиоксаль, формальдегид, ортофталевый альдегид) — 1,0%-й раствор пиросульфита (метабисульфита) натрия или универсальный нейтрализатор (см. выше);

— для кислот — щелочи в эквивалентном количестве;

— для щелочей — кислоты в эквивалентном количестве;

— для спиртов — вода;

— для композиционных средств — универсальный нейтрализатор (см. выше). Если в состав средства входят окислители, в нейтрализатор дополнительно вводят тиосульфат натрия (0,1 — 1,0%).

Взятие смывов для предприятий, выпускающих и реализующих пищевые продукты, производится в первую очередь с зон контакта поверхности с продукцией и/или зон хвата руками для прочих объектов (приложение 2 к настоящим МР).

Рекомендации по взятию смыва:

— смывы с площади меньше или равной 10 x 10 см (100 см2) отбирают стерильным тампоном с хлопком или синтетическим материалом;

— при отборе смывов с площади более 100 см2 следует использовать салфетку (5 * 5 см);

— смывы с мелких объектов (поверхность которых менее 100 см2) берут со всей поверхности; при необходимости — с нескольких единиц одноименных предметов (вилки, ножи и т.д.);

— смывы с перчаток берут только с наружной стороны ладонной поверхности перчатки;

— при взятии смывов с рук протирают тампоном ладонные поверхности обеих рук, проводя не менее 5 раз по каждой ладони и пальцам, потом протирают межпальцевые пространства, ногти и подногтевые пространства;

— при взятии смывов с мелких инструментов обтирается вся поверхность предмета, при заборе смывов с тарелок протирают всю внутреннюю поверхность. При взятии смывов с мелких предметов одним тампоном протирают три одноименных объекта — три тарелки, три ложки и т.п. У столовых приборов протирают их рабочую часть;

— смывы с санитарной одежды отбирают с помощью тампонов с четырех участков, каждый из которых должен быть не менее 25 см2, а именно нижняя часть каждого рукава и две площадки с верхней и средней частей передних пол одежды;

— если при взятии смывов с ровной поверхности используются металлические рамки-трафареты, ограничивающие площадь взятия смывов, то такие рамки-трафареты должны быть стерильны.

При взятии смывов составляется документ, включающий в себя информацию, необходимую для однозначной идентификации объекта, места взятия, основания и условий отбора, даты и времени взятия проб, условия и сроки доставки и иные дополнительные сведения (например, техническое и санитарное состояние оборудования, инвентаря, посуды и т.п.). Документ подписывают специалист, проводивший отбор, представитель объекта, на котором производилось взятие смывов, иные заинтересованные лица.

Время доставки смывов в лабораторию не должно превышать 6 часов с момента взятия, если иное не валидировано аккредитованной лабораторией в установленном порядке, как обеспечивающее достоверный результат.

II. МЕТОД ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ МИКРОБНОЙ ОБСЕМЕНЕННОСТИ

ОБЪЕКТОВ ВНЕШНЕЙ СРЕДЫ

3.1. Бактериологическое исследование микробной обсемененности объектов внешней среды предусматривает определение бактерий группы кишечных палочек (общих колиформных бактерий, термотолерантных колиформных бактерий), S. aureus, общей бактериальной обсемененности (общего микробного числа). По эпидемиологическим показаниям номенклатура исследований микробной обсемененности объектов внешней среды может быть расширена.

3.2. Методика посева смывов на бактерии группы кишечных палочек (общие колиформные бактерии, термотолерантные колиформные бактерии).

Для выявления бактерий группы кишечных палочек (далее — БГКП) производят посевы смывов на среду Кесслер или КОДА, при этом в пробирку со средой опускают тампон и переносят 0,2 — 0,3 см3 смывной жидкости. Посевы на средах Кесслер или КОДА инкубируют при температуре (37 1) °C в течение 18 — 24 часов. После инкубации из газ-положительных пробирок со среды Кесслер производят высев на плотную дифференциальную среду Эндо, со среды КОДА высев производят только в случае изменения окраски среды или ее помутнения. Среду Эндо инкубируют при температуре (37 1) °C в течение 18 — 24 часов. Из колоний, подозрительных или типичных для БГКП, готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют либо ставят тест Грегерсена, выполняют оксидазный тест. В случае обнаружения в препаратах грамотрицательных, не образующих спор палочек дают заключение о том, что в смывах присутствуют БГКП. При отсутствии признаков роста — газообразования или изменения цвета среды — дают заключение об отсутствии в смывах БГКП.

В случае исследования на общие колиформные бактерии (далее — ОКБ) и термотолерантные колиформные бактерии (далее — ТКБ), после взятия смыва тампон помещают на 10 — 15 мин в пробирку с раствором нейтрализатора (по п. 2.3), затем переносят в пробирку с питательной средой, погрузив тампон в пептонную воду или другую допустимую смачивающую среду по п. 2.3 и инкубируют при температуре (37 1) °C в течение 18 — 24 часов. После инкубации проводят высев на среду Эндо с последующей инкубацией при температуре (37 1) °C в течение 18 — 24 часов. При наличии роста на среде Эндо, проводят исследование выросших колоний на оксидазную активность и микроскопию, окрашенного по Граму препарата, или постановку теста Грегерсена. В случае обнаружения оксидазоотрицательных и грамотрицательных палочек определяют ферментациию лактозы до кислоты и газа. Для подтверждения наличия ОКБ посев инкубируют при температуре (37 1) °C в течение 48 часов, для подтверждения наличия ТКБ посев осуществляют в среду, предварительно прогретую до температуры (43 — 44) °C, и инкубируют при температуре (44 0,5) °C в течение 24 часов. При обнаружении кислоты и газа дают положительный ответ.

3.3. Методика посева на общую бактериальную обсемененность (общее микробное число).

Для определения общей бактериальной обсемененности (общего микробного числа) поверхностей 1,0 см3 смывной жидкости помещают в чашку Петри и заливают расплавленным питательным агаром. Чашки помещают в термостат при температуре (30 1) °C. Предварительный подсчет выросших колоний производят через 48 часов, окончательный — через 72 часа. Количество колоний, выросших на чашке, умножают на 10 для определения общего количества бактерий, содержащихся на поверхности исследуемого предмета.

3.4. Методика посева на S. aureus.

Для выявления S. aureus делают высев 0,2 — 0,3 см3 смывной жидкости в пробирку с 5,0 см3 6,5% солевого бульона. Засеянные пробирки инкубируют при при температуре (37 1) °C в течение 18 — 24 часов, после чего делают высев на одну из агаризованных селективно-диагностических сред: молочно-солевой агар (МСА), стафилококкагар, манитолагар, агар Байд-Паркер, яично-желточно-азидный агар, желточно-солевой агар (ЖСА) или другие питательные среды, предназначенные для роста стафилококков, разрешенных к применению в установленном порядке. Чашки с посевами инкубируют при температуре (37 1) °C в течение 18 — 48 часов.

Для подтверждения принадлежности колоний к S. aureus подозрительные колонии отсевают на скошенный в пробирке питательный агар для дальнейшего исследования. Инкубируют при температуре (37 1) °C в течение 18 — 24 часов.

После инкубации у выделенных штаммов проверяют морфологию, тинкториальные свойства (окраска по Граму или тест Грегерсена) и наличие плазмокоагулирующей активности в реакции плазмокоагуляции (РПК).

Идентификация и подтверждение видовой принадлежности S. aureus возможна с применением биохимической лабораторной идентификации, коммерческих тест-системы идентификации, методов иммуноферментного анализа, разделенного импеданса, масспектрометрии или микробиологических анализаторов в соответствии с действующими методическими документами и инструкциями производителей.

3.5. При проведении исследований объектов внешней допускается использование готовых и дегидратированных питательных сред, в том числе хромогенных, зарегистрированных в установленном порядке.

IV. ПРИНЦИПЫ ОЦЕНКИ РЕЗУЛЬТАТОВ

4.1. Критерием удовлетворительного качества санитарной обработки оборудования, посуды, инвентаря и др. служит отсутствие на поверхности обработанных предметов санитарно-показательных, условно-патогенных, а также патогенных микроорганизмов.

Видео:Периодическое изменение свойств химических элементов в ПСХЭ |Таблица Менделеева [Урок 10]Скачать

1. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

1.1 . Нормативный документ распространяется на реактивы отечественного и зарубежного производства, выпускаемые серийно, по окончании гарантийного срока их хранения или же без указания срока гарантийного хранения, а также на реактивы, изготовленные разовыми партиями, в том числе неспециализированными организациями.

1.1.1 . Нормативный документ (п. 8.6 ) может быть применен при выяснении причин, возможно вызванных качеством реактивов, если на результаты, полученные по методике, в которой используются реактивы с гарантийным сроком хранения, получены рекламация или неудовлетворительные результаты при арбитражном контроле или внешнем или внутреннем лабораторном контроле точности.

1.2 . Контроль реактивов проводится лабораторией с целью проверки их пригодности для количественного химического анализа, выполняемого по конкретным стандартизованным или аттестованным методикам. Контроль реактивов основан на применении методик, изложенных в нормативных документах на реактивы, стандартных образцов состава и аттестованных смесей.

1.3 . Использование реактива, признанного по настоящему нормативному документу пригодным к применению, прекращается, если на результаты, полученные по методике, в которой данный реактив используется, получена рекламация, или получены неудовлетворительные результаты при арбитражном контроле, или внешнем и внутреннем лабораторном контроле точности.

При этом выявление причин, приведших к рекламации или к неудовлетворительным показателям контроля точности и возможно вызванных качеством реактивов, признанным по настоящему нормативному документу пригодным к применению, проводится по алгоритму, изложенному в п. 8.6 настоящего нормативного документа.

1.4 . Основанием для возобновления применения такого реактива является выявление и устранение причин, приведших к рекламации или к неудовлетворительным показателям контроля точности, которые подтверждаются распоряжением начальника лаборатории о мероприятиях, направленных на обеспечение требований для получения достоверных результатов анализа.

Видео:Химия 8 класс (Урок№28 - Изменение свойств атомов элементов и веществ по периодам и группам.)Скачать

2. НОРМАТИВНЫЕ ССЫЛКИ

В настоящем документе использованы ссылки на следующие документы:

2.1 . ГОСТ 8.315 ГСИ. Стандартные образцы состава и свойств веществ и материалов. Общие положения.

2.2 . ГОСТ 12.0.003 ССБТ. Опасные и вредные производственные факторы. Классификация.

2.3 . ГОСТ 12.0.004 ССБТ. Организация обучения безопасности труда.

2.4 . ГОСТ 12.1.004 ССБТ. Пожарная безопасность. Общие требования.

2.5 . ГОСТ 12.1.019 ССБТ. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты.

2.6 . ГОСТ 12.4.009 . ССБТ. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание.

2.7 . ГОСТ 12.4.021 . ССБТ. Системы вентиляции. Общие требования.

2.8 . ГОСТ 3885 Реактивы и особо чистые вещества. Правила приемки, отбор проб, фасовка, упаковка и маркировка.

2.9 . ГОСТ 15895 Статистические методы управления качеством продукции. Термины и определения.

2.10 . ГОСТ 27025 Реактивы. Общие указания по проведению испытаний.

2.11 . ГОСТ 27384 Вода. Нормы погрешности измерений показателей состава и свойств.

2.12 . ГОСТ Р 8.563 ГСИ. Методики выполнения измерений.

2.13 . РД 50-674-88 Методические указания. Метрологическое обеспечение количественного химического анализа. Основные положения.

2.14 . МИ 2334-95 ГСИ. Смеси аттестованные. Порядок разработки, аттестации и применения.

2.15 . МИ 2335 -95 ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.

2.16 . Государственные стандарты, устанавливающие показатели качества реактивов (перечень ГОСТ приведен в Приложении 1 ).

Видео:Периодическое изменение свойств атомов химических элементов. 8 класс.Скачать

3. ТЕРМИНЫ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ

3.1 . Проба, объем пробы, точечная проба, подготовка пробы — по ГОСТ 15895 .

3.2 . Методики выполнения измерений — по ГОСТ Р 8.563 .

3.3 . Стандартные образцы — по ГОСТ 8.315 .

3.4 . Аттестованная смесь — по МИ 2334-95.

3.5 . Количественный химический анализ — по РД 50-674-88 .

Видео:Органическая Химия — ЭТО НУЖНО ВИДЕТЬ! Гибридизация орбиталейСкачать

4. ОБОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ

МВИ — методика выполнения измерений.

НД — нормативный документ.

КХА — количественный химический анализ.

СО — стандартный образец, ГСО — государственный СО, ОСО — отраслевой СО.

АС — аттестованная смесь.

ТУ — технические условия.

Видео:Классификация реакций: нуклеофилы, электрофилы, радикалыСкачать

5. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА РЕАКТИВОВ

5.1 . Фасовка, упаковка и маркировка контролируемого реактива должны соответствовать требованиям ГОСТ 3885 .

5.2 . Проверка качества реактивов, указанных в п. 1.1 , может быть осуществлена в результате:

— проверки качества реактива на соответствие требованиям НД, устанавливающего показатели его качества (ГОСТ, технические условия на реактив или ТУ на реактив. Приложения 1 и 2),

— оценки качества реактива по процедуре контроля точности выполнения КХА по МВИ, в которой используется реактив с истекшим сроком хранения.

Примечание. Для реактива, прошедшего контроль одним из выше приведенных способов, дополнительная проверка его другим способом не требуется.

Видео:Закономерность изменения свойств элементов в периодах и группах. 10 класс.Скачать

6. ПРОВЕРКА КАЧЕСТВА РЕАКТИВА НА СООТВЕТСТВИЕ ТРЕБОВАНИЯМ НОРМАТИВНОГО ДОКУМЕНТА, УСТАНАВЛИВАЮЩЕГО ПОКАЗАТЕЛИ ЕГО КАЧЕСТВА

6.1 . Контроль реактива на соответствие требованиям НД на реактив проводится, если на реактив с истекшим гарантийным сроком хранения имеется ГОСТ или ТУ и в лаборатории имеются условия (средства измерения, реактивы и т.п.) для проверки его качества. При этом контроль реактива должен осуществляться по методике, изложенной в НД на реактив, с выполнением общих указаний по проведению испытаний, рекомендуемых ГОСТ 27025 . Перечень ГОСТ на реактивы и особо чистые вещества приведены в Приложениях 1 и 2 .

6.2 . При положительной оценке качества реактива срок его хранения может быть продлен на срок хранения, указанный в НД на проверяемый реактив.

Видео:Химия ЕГЭ 2019. Задание № 2. Закономерности изменения химических свойств элементовСкачать

7. ОЦЕНКА КАЧЕСТВА РЕАКТИВА ПО ПРОЦЕДУРЕ КОНТРОЛЯ ТОЧНОСТИ КХА

7.1 . Оценка качества реактива по процедуре контроля точности КХА проводится, если на реактив отсутствует ГОСТ или ТУ, или реактив выпускается без указания гарантийного срока хранения, или если в лаборатории отсутствуют условия для его проверки по ГОСТ или ТУ.

7.2 . Контроль качества реактива проводят по стандартизованным или аттестованным (в соответствии с требованиями ГОСТ Р 8.563 ) методикам при незначимой систематической составляющей погрешности, в которых используется проверяемый реактив. Качество реактива оценивается по алгоритмам контроля точности КХА:

— с использованием одного или нескольких СО или АС;

— с использованием контрольной методики или методики, в которой данный реактив не используется, или с помощью той же методики, но с реактивом с не истекшим гарантийным сроком хранения (этот способ применяется на рабочих пробах, если необходимые СО и АС отсутствуют). При этом контрольная методика, используемая для сопоставления, должна иметь воспроизводимость не хуже воспроизводимости МВИ, предусматривающей применение проверяемого реактива, при незначимой систематической составляющей погрешности.

7.3 . Контролю подлежат используемые в МВИ:

— реактивы, изменение качества которых может сказаться на метрологических характеристиках методики (это реактивы, используемые для приготовления смесей и растворов, применяемых при построении градуировочных графиков, установлении концентрации растворов титрантов и контроле правильности анализов, в т.ч. и для приготовления АС, и т.п.);

— прочие реактивы (это реактивы, используемые в МВИ, но не оказывающие существенного влияния на ее метрологические характеристики).

Перечень реактивов, качество которых может сказаться на метрологических характеристиках МВИ и тех, которые не оказывают существенного влияния на метрологические характеристики МВИ, утверждается начальником лаборатории или ответственным за качество выполнения КХА.

7.3.1 . Качество реактивов, оказывающих влияние на метрологические характеристики МВИ, оценивается по специально спланированной и организованной процедуре контроля точности КХА, изложенной в разделе 8 .

7.3.2 . Контроль качества прочих реактивов проводится также по процедуре контроля точности КХА, а результаты контроля точности обсчитываются в соответствии с требованиями раздела 8 .

При контроле одного реактива, оказывающего влияние на метрологические характеристики МВИ, может осуществляться контроль качества не более трех реактивов, не оказывающих существенного влияния на метрологические характеристики МВИ. При положительных результатах контроля точности КХА прочие реактивы считаются пригодными к применению только в контролируемой МВИ.

7.4 . Периодичность контроля реактивов должна составлять одну треть гарантийного срока хранения, указанного в соответствующем нормативном документе на данный реактив (или на этикетке), но не чаще одного раза в полугодие. Если дата изготовления (или срок гарантийного хранения) не указаны, качество реактива контролируют один раз в полугодие (за исключением реактивов, срок гарантийного хранения которых шесть месяцев и менее).

7.5 . Если в лаборатории реактив с просроченным гарантийным сроком хранения используется в нескольких МВИ, основанных на принципиально различных методах измерений, проверку реактива проводят по каждой МВИ.

7.6 . Если реактив используется в нескольких МВИ, основанных на сопоставляемых методах измерений, его контроль проводится по методике, обладающей лучшей воспроизводимостью; при близких характеристиках воспроизводимости выбирают методику, используемую для проведения наиболее ответственного или массового для данной лаборатории анализа.

7.7 . Если методикой КХА предусмотрено использование реактива для определения нескольких компонентов, то контроль реактива проводится при определении двух или более компонентов, для которых установлены наиболее жесткие нормативы контроля точности.

Видео:8 класс. Периодическая система. Изменение свойств элементов.Скачать

8. ПЛАНИРОВАНИЕ ЭКСПЕРИМЕНТА ПО ПРОЦЕДУРЕ КОНТРОЛЯ ТОЧНОСТИ КХА

8.1 . Контроль реактивов проводят во всем диапазоне содержаний определяемого компонента (вещества), при этом экспериментальной проверкой должен быть охвачен каждый интервал содержаний, который характеризуется постоянством погрешности результата определения.

8.2 . При контроле реактивов следует точно соблюдать процедуры выполнения анализа, предусмотренные контролируемой МВИ. Анализ пробы (проб) должен проводиться в разные дни и желательно не менее чем двумя квалифицированными аналитиками лаборатории. Результаты анализа проб должны быть зафиксированы в рабочих журналах лаборатории или исполнителей.

8.3 . При отрицательном результате контроля хотя бы одного контролируемого интервала содержаний реактив изымают из употребления.

8.4 . Контроль реактивов может быть осуществлен по результатам:

— оперативного внутрилабораторного контроля точности,

— специально спланированной экспериментальной проверки.

8.5 . Оценка качества реактивов по результатам оперативного внутрилабораторного контроля точности проводится в соответствии с МИ 2335 -95 и алгоритмами контроля, указанным в МВИ.

8.5.1 . Контроль реактива оценивается в соответствии с требованиями п. 7.2 .

8.5.2 . При контроле реактива по сопоставлению результатов анализа проб двумя методиками результаты контрольных анализов, полученные с использованием методики, в которой данный реактив не используется, или с помощью той же методики, но с использованием реактива с не истекшим гарантийным сроком хранения, принимаются за установленные содержания.

8.5.3 . Контроль реактива проводят не менее чем по трем результатам оперативного внутрилабораторного контроля точности. При этом если все результаты контроля признаны удовлетворительными, реактив признается пригодным к применению по данной МВИ и срок гарантийного хранения продляется на одну треть срока, устанавливаемого НД на его показатели качества.

8.5.4 . Если один из результатов оперативного внутрилабораторного контроля точности признан неудовлетворительным или если отклонения между результатами оперативного контроля и контрольными характеристиками проб имеют один знак, то проводят дополнительно 1 — 2 процедуры проверки и обсчет результатов контроля реактива проводят по алгоритму, изложенному в п. 8.6 .

8.6 . Для проверки качества реактива при специально спланированном эксперименте, в интервале содержаний, характеризующемся постоянством погрешности, для одной и той же (или нескольких) пробы необходимо получить не менее четырех независимых результатов (k ³ 4). 1 Каждый результат это среднее из двух параллельных определений (n = 2).

1 В каждом узком интервале содержаний при анализе:

♦ одного стандартного образца (или АС) может быть получено четыре и более независимых результата (k ³ 4);

♦ двух или более стандартных образцов (или АС) может быть получено также четыре или более независимых результата (k ³ 4). Например, если анализируют два СО, то необходимо при k = 4 получить три результата для одного СО и один — для другого СО или по два результата для каждого из СО; если — три СО, то два результата для одного СО и по одному результату для двух других СО и т.п.

8.6.1 . Оценка пригодности реактива для выполнения КХА включает проверку значимости среднего систематического отклонения (расхождения) по:

— непараметрическому критерию t ¢ (Дисперсия неизвестна; k ³ 4. Схема расчета приведена в Приложении 3. Значения t ¢ приведены в Приложении 5 в таблице 2) или

— U-критерию (Дисперсия результатов известна; k ³ 8. Схема расчета приведена в Приложении 4. Значения t приведены в Приложении 5 в таблице 2).

Если рассчитанные значения непараметрического критерия t ¢ или U-критерия меньше табличных (Приложения 5, таблица 2), то систематическое отклонение незначимо и реактив признается пригодным к применению по данной МВИ и срок гарантийного хранения может быть продлен на одну треть срока, устанавливаемого НД на его показатели качества.

8.6.2 . При использовании U- и t ¢ -критериев предварительно решается вопрос об анормальности результатов (о наличии грубых промахов). Критериями анормальности являются критерии Смирнова-Груббса и Диксона (Приложение 5 , таблица 1 ), соответственно для известной и неизвестной дисперсии. Исключение резко отклоняющихся результатов требует большой осторожности и внимательного анализа условий, в которых получился этот результат. При числе результатов 4 £ k ³ 12 — не более трех. Если требуется отбросить более трех результатов, дальнейшие расчеты не выполняют, а делают вывод о непригодности реактива.

Примеры оценки качества реактивов даны по непараметрическому критерию t ¢ (таблицы 1 и 2) и по U-критерию (таблица 3).

Видео:ЛР-10-2-03 Определение коэффициента поверхностного натяжения методом отрыва капельСкачать

9. ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА ХИМИЧЕСКИХ РЕАКТИВОВ

9.1 . Результаты контроля качества химических реактивов, выполненного в соответствии с разделами 5 — 8 , отражаются в специальном журнале.

9.2 . Учет прошедших контроль и допущенных к последующему применению реактивов ведется в порядке, установленном в лаборатории. При этом устанавливается срок следующей проверки реактива.

Проверка качества дифенилкарбазида при фотометрическом определении хрома (VI) в сточных водах (ПНД Ф 14.1:2.52-96) с помощью непараметрического критерия t ¢ (дисперсия результатов неизвестна). Гарантийный срок хранения реактива два года. Результаты приведены в таблице.

Видео:Чистота химических реактивов. Химия – простоСкачать

ГОСТ Р 51352-99
Наборы реагентов для клинической лабораторной диагностики. Методы испытаний

Купить ГОСТ Р 51352-99 — бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО «ЦНТИ Нормоконтроль»

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

• Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
• Курьерская доставка (7 дней)
• Самовывоз из московского офиса
• Почта РФ

Распространяется на наборы реагентов для клинической лабораторной диагностики природного или искусственного происхождения, предназначенные для применения в медицинской и научно-исследовательской практике и используемые в клинико-диагностических, биохимических, иммунологических и генодиагностических лабораториях медицинских учреждений при проведении любых диагностических исследований in vitro, а также на составные части этих наборов, имеющие функциональное медицинское назначение и изготовляемые отдельно. Стандарт не распространяется на медицинские иммунобиологические препараты, предназначенные для специфической профилактики, диагностики и лечения инфекционных, паразитарных заболеваний и аллергических состояний.

Видео:Химические реактивы, реагенты. Что нам следует знатьСкачать

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

4 Методы испытаний

Этот ГОСТ находится в:

• Раздел Экология
  • Раздел 11 ЗДРАВООХРАНЕНИЕ
    • Раздел 11.100 Лабораторные препараты

• Раздел Электроэнергия
  • Раздел 11 ЗДРАВООХРАНЕНИЕ
    • Раздел 11.100 Лабораторные препараты

Организации:

Kits of reagents for clinical laboratory diagnostics. Test methods

• ГОСТ 8.315-97Государственная система обеспечения единства измерений. Стандартные образцы состава и свойств веществ и материалов. Основные положения
• ГОСТ Р 51088-97Наборы реагентов для клинической лабораторной диагностики. Общие технические условия. Заменен на ГОСТ Р 51088-2013.

Чтобы бесплатно скачать этот документ в формате PDF, поддержите наш сайт и нажмите кнопку:

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Видео:🔴ЕГЭ Химия 2022 | Задание 2 | Закономерности изменения химических свойств элементов | Все секретыСкачать

НАБОРЫ РЕАГЕНТОВ ДЛЯ КЛИНИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ

Видео:получение водорода и изучение его свойств/химия 8 классСкачать

Методы испытаний

ГОССТАНДАРТ РОССИИ Москва

1 РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 380 «Клинические лабораторные исследования и диагностические тест-системы in vitro* и Комитетом по новой медицинской технике Минздрава России

2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 11 ноября 1999 г. № 402-ст

3 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

© ИПК Издательство стандартов, 2000

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Госстандарта России

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

НАБОРЫ РЕАГЕНТОВ ДЛЯ КЛИНИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ

Kits of reagents for clinical laboratory diagnostics. Test methods

Дата введения 2000—07—01

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на наборы реагентов для клинической лабораторной диагностики (далее — наборы) природного или искусственного происхождения, предназначенные для применения в медицинской и научно-исследовательской практике и используемые в клинико-диагностических, биохимических, иммунологических и генодиагностических лабораториях медицинских учреждений при проведении любых диагностических исследований in vitro, а также на составные части этих наборов, имеющие функциональное медицинское назначение и изготовляемые отдельно.

Стандарт не распространяется на медицинские иммунобиологические препараты, предназначенные для специфической профилактики, диагностики и лечения инфекционных, паразитарных заболеваний и аллергических состояний: вакцины бактерийные и вирусные, анатоксины, иммуноглобулины нормальные и специфические, сыворотки диагностические и антитоксические лечебные, бактериофаги диагностические и лечебно-профилактические, препараты нормфлоры (бифидумбак-терин, споробактерин, бактисубтил и др ), интерфероны, цитокины и другие биологические иммуномодуляторы для стимуляции антиинфекционного иммунитета, аллергены бактериальные, грибковые, пищевые, бытовые, пыльцевые и другие, диагностические тест-системы для иммунофер-ментного анализа инфекционных и паразитарных заболеваний, диагн ости кумы антигенные, анти-тельные, питательные среды (бактериальные, вирусологические).

Настоящий стандарт устанавливает методы испытаний наборов.

Технические требования к наборам — по ГОСТ Р 51088.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 8.315-97 Государственная система обеспечения единства измерений. Стандартные образцы состава и свойств веществ и материалов. Основные положения

ГОСТ Р 51088-97 Наборы реагентов для клинической лабораторной диагностики. Общие технические условия

3 Определения

В настоящем стандарте применяют следующие термины с соответствующими определениями:

набор: Комплект специально подобранных реагентов (реактивов), составных частей и инструкций по проведению анализа, предназначенный для определения in vitro одного конкретного вещества (или активности фермента), нескольких конкретных веществ (или суммарной активности ферментов), а также для детекции участка генома (ГОСТ Р 51088).

компоненты набора: Реагенты (реактивы) и составные части (планшеты, стрипы, пробирки и т. п.), используемые при проведении анализа (ГОСТ Р 51088).

эксплуатационная документация на наборы: Инструкция по применению набора, паспорт (ГОСТ Р 51088).

иммунохимиисский анализ: Метод анализа, основанный на обратимом и нековалентном связывании антигена с антителом. С помощью иммунохимического анализа идентифицируют, а также качественно, полуколичественно или количественно определяют антигены и антитела (ГОСТ Р 51088).

антиген: Вещество, которое обратимо и нековалентно связывается со специфическими центрами антител (ГОСТ Р 51088).

антитела: Белки, продуцируемые лимфоцитами В, которые используют для связывания, обнаружения или определения антигена (ГОСТ Р 51088).

радиоиммунологический анализ: Метод анализа, основанный на иммунохимической реакции антигена со специфическим антителом, проводимой in vitro в присутствии меченного радионуклидом антигена или антитела (ГОСТ Р 51088).

иммуноферментный анализ: Метод анализа, основанный на иммунохимической реакции антигена со специфическим антителом, проводимой in vitro в присутствии меченного ферментом соединения или ферментзависимого субстрата (ГОСТ Р 51088).

иммунофлуоресцентный анализ: Метод анализа, основанный на иммунохимической реакции антигена со специфическим антителом, проводимой in vitro в присутствии флуоресцентной метки (ГОСТ Р 51088).

иммунохемилюминесцентный анализ: Метод анализа, основанный на иммунохимической реакции антигена со специфическим антителом, проводимой in vitro в присутствии хемилюминесцентной метки (ГОСТ Р 51088).

иммунохроматографнческий анализ: Метод анализа, основанный на конкуренции определяемого вещества и конъюгата аналога определяемого вещества за субстрат на полоске хроматографической бумаги (ГОСТ Р 51088).

микроанализ нуклеотидных последовательностей: Метод анализа, основанный или на процессе специфического умножения количества исследуемых участков дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) или рибонуклеиновой кислоты (РНК), в том числе методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с последующей детекцией сигнала, или на прямой детекции сигналов, возникающих при гибридизации с синтетическими зондами (ГОСТ Р 51088).

фотометрический анализ: Метод анализа, основанный на избирательном поглощении инфракрасного, видимого или ультрафиолетового излучения молекулами определяемого вещества или его соединения с соответствующим реагентом (ГОСТ Р 51088).

коагулометрический анализ: Метод анализа системы свертывания крови, основанный на регистрации времени фибринообразования (ГОСТ Р 51088).

чувствительность: Наименьшее количество анализируемого вещества (или активности фермента, или копий участка генома), определяемое с помощью данного набора.

специфичность: Способность данной аналитической системы (набора) определять только то вещество (или активность фермента, или участок генома), для которого эта система (набор) предназначена.

«линейность»: Отклонение значения концентрации определяемого вещества (или активности фермента) от теоретического в диапазоне рабочих концентраций.

«открытие»: Проверка соответствия значения определяемой концентрации вещества (или активности фермента) расчетной величине, полученной путем смешивания равных объемов контрольных растворов (калибровочных проб, контрольных сывороток или биологического материала) с установленной концентрацией (или активностью).

коэффициент вариации: Показатель воспроизводимости результатов определения, рассчитанный как отношение значения среднего квадратического отклонения к среднему арифметическому значению.

интерсепт: Концентрация анализируемого вещества, которая соответствует определенной точке на калибровочном фафике.

4 Методы испытаний

4.1 Проверка комплектности и составных частей набора

При получении набора необходимо проверить:

— комплектность набора в соответствии с эксплуатационной документацией;

— внешний вид и состояние упаковки набора и его компонентов;

— наличие маркировки набора и его компонентов и соответствие маркировки требованиям нормативной документации.

Компоненты набора должны быть подвергнуты визуальному контролю.

Осмотр компонентов набора заключается в установлении соответствия показателей внешнего вида требованиям нормативной документации на наборы конкретных видов:

— агрегатное состояние (таблетка, порошок, аморфная масса, жидкость и т. п.);

— прозрачность (для жидкостей);

— наличие или отсутствие осадка или хлопьев (для жидкостей);

4.2 Экспериментальная проверка качества наборов

Экспериментальная проверка качества наборов должна быть основана на контроле качества системы определения анализируемого соединения в целом применительно к набору конкретного вида.

Измерительная аппаратура, лабораторная посуда, дозирующие устройства, весы и другие принадлежности, используемые при испытаниях, должны быть поверены в соответствии с требованиями, предъявляемыми к лабораторному оборудованию.

В случае, если отклонения значений pH растворов, входящих в состав набора, от заданных могут повлиять на правильность анализа, необходимо проводить контроль pH растворов.

Образцы наборов представляют на испытания в количестве, необходимом для проведения трех полных анализов в соответствии с требованиями нормативной документации на наборы конкретного вида.

4.2.1 Наборы для иммунохимического анализа

4.2.1.1 Наборы для радиоиммунологического анализа

Общая радиоактивность меченого компонента

Значение общей радиоактивности компонента, меченного радионуклидом ( ,25 1 или 3 Н), является основанием для расчета некоторых других показателей. Кроме того, определение общей радиоактивности позволяет проконтролировать количество поставляемого меченого вещества.

Радиоактивность компонента А, килобеккерели (кБк), меченного 125 1, определяют на день паспортизации набора по формуле

где Nскорость счета пробы меченого компонента, имп/мин;

V— общий объем меченого компонента в наборе, см 3 ;

v — объем пробы меченого компонента, взятой для измерения скорости счета, см 3 ; /— эффективность счета гамма-счетчика, доли единицы;

коэффициент перевода импульсов в минуту в килобеккерели.

Радиоактивность компонента А, кБк, меченного 3 Н, определяют надень паспортизации набора по формуле

где N, — скорость счета пробы меченого компонента, имп/мин;

V— общий объем меченого компонента в наборе, см 3 ;

V— объем пробы меченого компонента, взятой для измерения скорости счета, см 3 ;

/— эффективность счета бета-счетчика, доли единицы;

ев _x^qqq — коэффициент перевода импульсов в минуту в килобеккерели;

К— коэффициент поправки на гашение (определяют экспериментально путем измерения скорости счета образцового радиоактивного раствора трития в соответствующей сцин-тилляциоиной жидкости до и после внесения в нее определенного количества растворенного меченого компонента и компонента, не содержащего меченое соединение). Тотальная (общая) радиоактивность, внесенная в анализируемую пробирку Для расчета ряда показателей качества набора необходимо определить тотальную (общую) радиоактивность (7), внесенную в анализируемую пробирку. Значение Топределяют как числовой результат скорости счета радиоактивности, внесенной в каждую аналитическую пробирку.

Для определения Т в пробирки вносят компонент, содержащий радионуклид, в объеме, указанном в инструкции по применению набора, после чего добавляют в пробирки все компоненты инкубационной среды в объеме, указанном в инструкции по применению набора; центрифугирование не производят.

Радиометрию каждой пробирки проводят в отдельности и определяют среднее арифметическое значение и значение коэффициента вариации. Достоверность сосчитанных импульсов должна быть в пределах 1—2 %, коэффициент вариации счета Г-проб не должен превышать 3 %, интенсивность счета Гдолжна быть не менее 10000 имп/мин для получения достоверности счета с погрешностью менее 1 %.

Специфически связанная радиоактивность (специфическое связывание)

Специфическое связывание определяют с помощью нулевой калибровочной пробы, т. е. при нулевой концентрации определяемого вещества.

Значение специфического связывания (применяют также термин «максимальное связывание») выражают в процентах как отношение значения радиоактивности образца с нулевой концентрацией, из которого исключено значение неспецифически связанной радиоактивности, к общей радиоактивности образца:

4х1оо. 3 >

где Bq — скорость счета в пробирке, содержащей нулевую калибровочную пробу, имп/мин;

Т— скорость счета тотальной радиоактивности, внесенной в аналитическую пробирку, имп/мин.

Значение специфического связывания дает основную информацию о протекании иммунохи-мической реакции между антителами и меченым антигеном в данной системе для радиоиммуноло-гичсского анализа. Его изменения могут быть обусловлены прежде всего изменениями концентраций обоих компонентов в реакционной смеси и их свойств, особенно сродства и емкости связи антител, удельной активности радиоиндикатора и его повреждением, а также изменениями, происходящими во время хранения или при инкубации. Кроме того, на значение специфического связывания могут оказать влияние и другие компоненты реакционной смеси, условия инкубации, а также правильность выполнения процедур сепарации. Любое заметное отклонение значения Bq/Tx 100 (более чем на 5 %) от обычно получаемых значений при данной методике должно служить сигналом о нарушении стандартных условий определения и качества составных частей набора, а также должно послужить основанием к дополнительной проверке набора.

Значение специфического связывания определяют следующим образом: в пробирки (8—10 шт.) вносят нулевую калибровочную пробу и все компоненты реакционной смеси, после чего проводят все процедуры, предусмотренные инструкцией по применению набора.

В идеале значение специфического связывания должно быть близко к 50 %. Чем ниже этот показатель, тем меньше разрешающая способность калибровочной кривой набора, поскольку калибровочная кривая будет более пологой. При высоком значении BJTх 100 чувствительность набора увеличивается, но «рабочий» отрезок калибровочной кривой уменьшается.

Неспецифически связанная радиоактивность (неспецифическое связывание)

Нсспецифическое связывание — это неспецифически связанная радиоактивность в образце при отсутствии специфических антител.

Определение значения неспецифического связывания дает прежде всего информацию об эффективности используемого метода сепарации свободной и связанной фракций и о неспецифическом захвате свободного радиоиндикатора в связанной фракции. Причиной неспецифического связывания прежде всего является неспецифическая сорбция свободного радиоиндикатора на стенках пробирок, на поверхности осадка и сорбентов. Кроме того, неспецифическое связывание — это влияние перекрестных реакций в присутствии эндогенных антител в анализируемых образцах и воздействие некоторых неспецифических факторов вследствие их присутствия в анализируемых образцах.

Поскольку неспецифическос связывание — одна из основных проблем радиоиммунологичес-кого анализа, его исследование и контроль важны и необходимы. При этом значение неспецифического связывания необходимо вычитать из значений полученных радиоактивностей для всех калибровочных проб.

Неспецифическое связывание определяют следующим образом: в пробирки (8—10 шт.) вносят нулевую калибровочную пробу (или любую калибровочную пробу, или сыворотку крови человека) и все компоненты набора, предусмотренные инструкцией по его применению, за исключением

антисыворотки (антител). Затем проводят все процедуры, предусмотренные инструкцией по приме нению набора.

Значение неспецифического связывания В_п, %, рассчитывают по формуле

Видео:Видеоурок по химии "Типы химических реакций в органической химии"Скачать

В_н = | X 100,

где В — среднее арифметическое значение скорости счета в отдельных пробирках, имп/мин;

Т — среднее арифметическое значение тотальной радиоактивности, имп/мин.

Значение неспецифического связывания должно быть не более 5 %.

При использовании твердофазного метода значение неспецифического связывания не определяют.

Соотношение скоростей счета калибровочных проб

Для оценки правильности работы системы для радиоиммунологического анализа необходимо проводить определение соотношения скоростей счета (имп/мин) калибровочных проб. Значения скоростей счета калибровочных проб могут иметь прямую зависимость от концентрации анализируемого антигена (или антител): В$ . . . > В_мжкс (метод конкурентного связывания).

Соотношение скоростей счета калибровочных проб с максимальным и минимальным содержанием антигена (антител) и калибровочной пробы, не содержащей антиген (антитела)

Наклон калибровочной кривой в данной точке является одним из факторов, который определяет разрешающую способность и точность системы для измерения соответствующей концентрации анализируемого антигена. Значение соотношения скоростей счета калибровочной пробы с минимальным содержанием антигена и калибровочной пробы, не содержащей антиген |(Д_МИН—В_Н)/(В₀— —В_н) х 100], может влиять на значение чувствительности системы для радиоиммунологического анализа. Соотношение же скоростей счета калибровочной пробы с максимальным содержанием антигена и калибровочной пробы, не содержащей антиген К4шк

4|)/(Аг > ‘4|) х 100], хотя и не отражает разрешающую способность отдельных участков калибровочного графика, однако является одним из показателей стабильности системы для радиоиммунологического анализа при сравнении разных наборов одной серии и наборов разных серий.

Допускается определять соотношение скоростей счета калибровочной пробы с минимальным содержанием антигена и калибровочной пробы с максимальным содержанием антигена |(Д_МИИ— —В_И)/(В_илХ1С— В_н) х 100] и соотношение скоростей счета предпоследней калибровочной пробы (2?_пр) и калибровочной пробы с максимальным содержанием антигена |(2f_IIp— B_H)/(B_utKC— В_н) х 100].

Значение чувствительности определяют следующим образом: в пробирки (8—10 игт.) вносят нулевую калибровочную пробу и все компоненты набора, предусмотренные инструкцией по его применению, после чего проводят все процедуры определения. На основании полученных данных вычисляют среднее квадратическое отклонение о по формуле

где B_t — значение скорости счета меченого соединения каждого измерения в пробирках с _ нулевой калибровочной пробой, имп/мин;

В — среднее арифметическое значение скорости счета меченого соединения в пробирках с нулевой калибровочной пробой, имп/мин;

I — знак суммирования; п — число определений.

На оси ординат калибровочного графика откладывают значение (Д₀—2с) — если применяют принцип конкурентного связывания, или (2^+2о) — если используют сэндвич-вариант; из полученной точки проводят прямую, параллельную оси абсцисс, до пересечения с калибровочным пэафиком; из точки пересечения опускают перпендикуляр на ось абсцисс.

Соответствующая этому значению концентрация характеризует чувствительность, которую следует выражать в значениях концентрации анализируемого вещества.

Значение чувствительности зависит от крутизны калибровочного графика в области низких

концентраций, от точности определения нулевой калибровочной пробы, от константы ассоциации специфических антител (чем больше константа ассоциации, тем чувствительнее система для ралиоиммуноанализа), а также от значения соотношения скоростей счета калибровочной пробы с минимальным содержанием определяемого антигена и нулевой калибровочной пробы.

Тест на «открытие»

При постановке теста на «открытие* смешивают, как правило, равные объемы контрольной сыворотки (плазмы) и калибровочной пробы. Вместо контрольной сыворотки (плазмы) можно использовать калибровочную пробу с минимальной концентрацией определяемого вещества.

Тест на «открытие* ОТ, %, проводят в восьми-десяти повторностях. В исследуемой пробе определяют концентрацию анализируемого антигена и сравнивают ее значение с расчетным по формуле

где С_пр — полученное по калибровочному фафику (практическое) значение концентрации анализируемого антигена в исследуемой пробе;

Q — расчетное (теоретическое) значение концентрации антигена в исследуемой пробе.

Значение «открытия* должно находиться в пределах 90—110 %.

Тест на «открытие* является одним из основных для решения вопроса о специфичности и правильности проведения анализа. Важность данного теста заключается также и в том, что при его постановке сравнивают, как взаимодействуют анализируемый антиген, находящийся в исследуемой пробе (например, в контрольной сыворотке или плазме), и анализируемый антиген, находящийся в калибровочной пробе, с антителом. Если они взаимодействуют по-разному, что называется «мат-риксным эффектом*, то появляются систематические ошибки и непостоянство результатов определения.

В случае экспериментальной проверки качества наборов, предназначенных для определения антигена (антител) в сухих пятнах крови, тест на «открытие* не проводят.

Тест на *.линейность»

Этот тест заключается в последовательных разведениях калибровочной пробы с максимальной концентрацией антигена или контрольной сыворотки (плазмы) с высокой концентрацией этого антигена в 2,4, 8 и т. д. раз (возможны и другие пропорции разведения) с последующим сравнением полученных результатов с ожидаемыми при этих разведениях концентрациями анализируемого антигена. Разведения должны быть выполнены с таким расчетом, чтобы тест охватывал все участки калибровочного графика, поэтому наряду с максимальной калибровочной пробой можно использовать калибровочные пробы со средней и даже низкой концентрацией анализируемого вещества. Для разведения следует использовать нулевую калибровочную пробу или сыворотку (плазму) крови, не содержащую исследуемый антиген.

Тест на «линейность* Л, %, проводят в восьми-десяти повторностях. В анализируемых образцах определяют концентрацию исследуемого антигена, умножают на коэффициент разведения и сравнивают ее значение с расчетным по формуле

где Спр — полученное по калибровочному графику (практическое) значение концентрации анализируемого антигена в исследуемых пробах;

С_т — расчетное (теоретическое) значение концентрации анализируемого антигена в исследуемых пробах.

Значение «линейности* должно находиться в пределах 90—110 %.

Тест на «линейность» важен тем, что позволяет проконтролировать, насколько правильно калиброваны калибровочные пробы относительно друг друга. При разведении одной калибровочной пробы идет сравнение этой пробы с калибровочными пробами, близкими по концентрации к полученным результатам.

Тест на «линейность* позволяет устранить систематические ошибки, связанные с различной специфичностью анализа, на каждой стадии калибровки, а также позволяет оценить правильность работы системы для радиоиммунологического анализа на всех участках калибровочного графика.

В случае экспериментальной проверки качества наборов, предназначенных для определения антигена (антител) в сухих пятнах крови, тест на «линейность* не проводят.

При определении коэффициента вариации следует использовать аттестованные контрольные сыворотки (плазмы, сухие пятна крови) с низким, средним или высоким содержанием анализируемого антигена. Контроль воспроизводимости проводят в восьми-десяти повторностях. Воспроизводимость проверяют как для одного набора, так и для разных наборов одной серии и наборов разных серий.

Значение коэффициента вариации К.В, %, определяют по формуле

где С,— значение каждого измерения концентрации анализируемого антигена в контрольной _ сыворотке;

С — среднее арифметическое значение концентрации анализируемого антигена в контрольной сыворотке;

Г — знак суммирования; п — число определений.

Воспроизводимость результатов считают удовлетворительной, если значение К.В не превышает 8 % при проведении анализа в биологических жидкостях и 15 % — при проведении анализа в сухих пятнах биологических жидкостей.

Значение интерсепта определяют по калибровочному графику, построенному в координатах logit—log (на оси ординат откладывают значение соотношения скоростей счета калибровочных проб — В_х и нулевой калибровочной пробы — Bq, а на оси абсцисс — значение концентрации антигена в логарифмическом масштабе). Если работа набора основана на принципе конкурентного связывания, то используют соотношение В_х /Bq у 100, если на принципе сэндвич-варианта — соотношение

1 (В„—Вп)/(В — Вп) у 100]. Значение интерсепта выражают в тех же единицах, что и значение

концентрации анализируемого антигена.

При контроле качества наборов для радиоиммунологического анализа обычно пользуются тремя значениями интерсепта — 20 % (25 %), 50 % и 80 % (75 %), хотя допускаются и другие варианты. Отрезок калибровочного графика, ограниченный значениями 20 % и 80 % интсрсепта, — это «рабочий» отрезок калибровочного графика, являющийся наиболее чувствительной его частью. Значение 50 % интсрсепта должно лежать на самой крутой части калибровочного графика и должно соответствовать одной и той же средней концентрации анализируемого антигена в пределах установленных колебаний.

Значения интсрсепта отражают стабильность концентрации антигена в анализируемой пробе в течение длительного времени; эти значения не должны в большой степени варьировать от набора к набору по наборам конкретного вида, так как от этого зависит достоверность получаемых в клинической практике результатов при использовании наборов разных серий.

Концентрация анализируемого антигена в контрольной сыворотке (плазме, сухом пятне крови)

Для проверки правильности (достоверности) определения указанной концентрации используют метод, основанный на применении контрольных сывороток (плазм, сухих пятен крови) с известной концентрацией анализируемого антигена, которые по составу и остальным свойствам должны быть наиболее близки к образцам анализируемого материала (во избежание «матриксного эффекта*). Наборы для радиоиммунологического анализа, как правило, комплектуют контрольными сыворотками с известным содержанием анализируемого антигена. Сравнение полученной в результате определения и указанной в паспорте на набор концентрации позволяет оценить достоверность (правильность) ее определения конкретным набором для радиоиммунологического анализа.

4.2.1.1.1 Наборы для иммунорадиометрического анализа

Экспериментальная проверка качества этих наборов включает в себя определение следующих показателей: общая радиоактивность меченого компонента — по формуле (1) или по формуле (2); тотальная (общая) радиоактивность; соотношение скоростей счета калибровочных проб: В₀ . > ОП_ШЛС при использовании метода конкурентного связывания, ОП₀ . . . > //Ф_М4КС при использовании метода конкурентного связывания, #Ф₀

💥 Видео

"Химическая посуда и дополнительное оборудование"Скачать

Закономерности изменения свойств элементов в Периодической системе Д.И.Менделеева. 1 часть.10 класс.Скачать